|
طراحی بیوانفورماتیکی و ساخت کاست ژنی دربردارندهی ژنهای blf1، ctxB و stxB
|
خانم زهرا مشیری1  ، دکتر رحیم حداد1 ، دکتر حسین هنری* 2 |
1- دانشگاه بین المللی امام خمینی (ره) قزوین
2- ، مرکز علم و فناوری زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران ، honari.hosein@gmail.com |
|
|
چکیده: (554 مشاهده) |
مقدمه
باکتری بورخولدریا سودومالئی، ویبریوکلرا و شیگلا دیسانتری عامل بیماری میلوئیدوزیس، وبا و شیگلوز در انسان میباشند. پروتئینهای BLF1 مربوط به B. pseudomallei، CTxB ویبریوکلرا و StxB شیگلا دیسانتری خاصیت آنتیژنیک، ادجوانتی مخاطی، حاملی و ایمنی‌زایی دارند. هدف این مطالعه، ساخت کاست ژنی دربردارندهی ژنهای blf1، ctxB وstxB و بیان پروتئین آنها در E. coli میباشد.
مواد و روشها
با استفاده از نرمافزارهای بیوانفورماتیک Protparam و Modeller، حالتهای مختلف پروتئین کایمریک ژنهای مربوطه بررسی شد. ساختار دوم پروتئین و اپیتوپهای خطی و ساختاری نیز تعیین گردید. ژنهای blf1 و stxB از پلاسمید pET28a-BLF1-STxB، PCR و قطعه 850 جفت بازی BLF1-STxB با جایگاههای آنزیمی NotI وSalI در وکتور بیانی pET28a-CTxB زیرهمسانهسازی و به باکتری E. coli سویهی BL21(DE3) ترانسفورم شد. پس از توالی‌یابی، بهینه‌سازی بیان ژن سنتزی تحت القایIPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside) و درجه حرارت 25 درجه سانتیگراد انجام و بوسیله تکنیک SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفت.
یافتهها
شاخص ناپایداری پروتئین کایمر برابر با 06/40 و نیمهعمر آن در E. coli بیش از 10 ساعت به دست آمد. شاخص سازگاری کدون سازهی کایمر به 9/0 و محتوای GC آن به 9/54 درصد افزایش یافت. بهترین ترتیب ممکن برای ساخت واکسن نوترکیب، ممزوج سهتایی CTxB-BLF1-STxB بدست آمد. بیان پروتئین نوترکیب از ژن سنتزی تحت القای IPTG، منجر به تولید پروتئینی با وزن مولکولی 48 کیلودالتون شد.
نتیجهگیری
با توجه به توانایی توقف پروتئینسازی BLF1، خاصیت حاملی STxB و خاصیت ادجوانتی CTxB، قرار دادن این سه ژن در یک کاست ژنی به بهترین حالت، میتواند به عنوان یک کاندید واکسن مناسب مورد توجه قرار گیرد. |
|
| واژه‌های کلیدی: بورخولدریاسدومالئی، سم بی ال اف 1، میلوئیدوزیس، وبا، شیگلوز |
|
|
متن کامل [PDF 836 kb]
(34 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي اصیل |
موضوع مقاله:
انفورماتیک پزشکی
دریافت: 1398/6/1 | ویرایش نهایی: 1399/10/1 | پذیرش: 1399/2/30 | انتشار الکترونیک پیش از انتشار نهایی: 1399/3/18 | انتشار: 1399/3/10 | انتشار الکترونیک: 1399/3/10
|
|
|
|
|
|
