:: دوره 8، شماره 4 - ( سال هشتم، شماره چهارم، زمستان 1399 ) ::
دوره 8 شماره 4 مجله دانشکده علوم پزشکی نیشابور - صفحه 73 - 87 برگشت به فهرست نسخه ها
طراحی بیوانفورماتیکی و ساخت کاست ژنی دربردارنده‌ی ژن‌های blf1، ctxB و stxB
خانم زهرا مشیری1 ، دکتر رحیم حداد1 ، دکتر حسین هنری* 2
1- دانشگاه بین المللی امام خمینی (ره) قزوین
2- ، مرکز علم و فناوری زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران ، honari.hosein@gmail.com
چکیده:   (554 مشاهده)
مقدمه
باکتری بورخولدریا سودومالئی، ویبریوکلرا و شیگلا دیسانتری عامل بیماری میلوئیدوزیس، وبا و شیگلوز در انسان می­باشند. پروتئین­های BLF1 مربوط به B. pseudomallei، ­CTxB ویبریوکلرا و StxB شیگلا دیسانتری خاصیت آنتی­ژنیک، ادجوانتی مخاطی، حاملی و ایمنی‌زایی دارند. هدف این مطالعه، ساخت کاست ژنی دربردارنده­ی ژن­های blf1، ctxB وstxB  و بیان­ پروتئین آن­ها در E. coli می­­­باشد.
مواد و روش­ها
با استفاده از نرم­افزار­های بیوانفورماتیک Protparam و Modeller، حالت­های مختلف پروتئین کایمریک ژن­های مربوطه بررسی شد. ساختار دوم پروتئین و اپی­توپ­های خطی و ساختاری نیز تعیین گردید. ژن‌های blf1 و stxB از پلاسمید pET28a-BLF1-STxB، PCR و قطعه 850 جفت بازی BLF1-STxB با جایگاه­های آنزیمی NotI وSalI  در وکتور بیانی pET28a-CTxB زیرهمسانه­سازی و به باکتری E. coli سویه­ی BL21(DE3) ترانسفورم شد. پس از توالی‌یابی، بهینه‌سازی بیان ژن سنتزی تحت القایIPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside)  و درجه حرارت 25 درجه سانتیگراد انجام و بوسیله تکنیک SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفت.
یافته­ها
شاخص ناپایداری پروتئین کایمر برابر با 06/40 و نیمه­عمر آن در E. coli بیش از 10 ساعت به دست آمد. شاخص سازگاری کدون سازه­ی کایمر به 9/0 و محتوای GC آن به 9/54 درصد افزایش یافت. بهترین ترتیب ممکن برای ساخت واکسن نوترکیب، ممزوج سه­تایی CTxB-BLF1-STxB بدست آمد. بیان پروتئین نوترکیب از ژن سنتزی تحت القای IPTG، منجر به تولید پروتئینی با وزن مولکولی 48 کیلودالتون شد.
نتیجه­گیری
با توجه به توانایی توقف پروتئین­سازی BLF1، خاصیت حاملی STxB و خاصیت ادجوانتی CTxB، قرار دادن این سه ژن در یک کاست ژنی به بهترین حالت، می­تواند به عنوان یک کاندید واکسن مناسب مورد توجه قرار گیرد.
واژه‌های کلیدی: بورخولدریاسدومالئی، سم بی ال اف 1، میلوئیدوزیس، وبا، شیگلوز
متن کامل [PDF 836 kb]   (34 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي اصیل | موضوع مقاله: انفورماتیک پزشکی
دریافت: 1398/6/1 | ویرایش نهایی: 1399/10/1 | پذیرش: 1399/2/30 | انتشار الکترونیک پیش از انتشار نهایی: 1399/3/18 | انتشار: 1399/3/10 | انتشار الکترونیک: 1399/3/10


XML   English Abstract   Print



دوره 8، شماره 4 - ( سال هشتم، شماره چهارم، زمستان 1399 ) برگشت به فهرست نسخه ها